Táirgí

LecA (PA-IL) is lectin cíteatocsaineacha agus adhésin a tháirgtear ag Pseudomonas aeruginosa a nascann galactosides hidreafóbach le sainiúlacht agus ard-chleamhnas.Trí úsáid a bhaint as comhleá aistriúcháin lecA-egfp agus anailís imdhíonblot ar an maitrís eischeallach bithscannán, léirímid go gcuirtear lecA in iúl i gcealla a fhástar sa bhithscannán.I dtástálacha bithscannáin statacha ar pholaistiréin agus ar chruach dhosmálta araon, laghdaíodh doimhneacht bithscannáin agus clúdach dromchla trí shóchán lecA agus feabhsaíodh é sa phéine ró-tháirgeadh LecA PAO-P47.Cuireadh bac freisin ar chlúdach dromchla bithscannáin ag an mbrú tuismitheora, PAO-P47 ach ní an tsóiteáin lecA ar chúpóin chruach mar gheall ar fhás i láthair ceachtar iseatropyl-beta-D-thiogalactosid (IPTG) nó p-nitrophenyl-alpha-D-galactoside ( GNC).Ina theannta sin, d’fhéadfaí bithscannáin aibí fiáine de chineál a fhoirmítear in éagmais na galactosides hidreafóbach seo a scaipeadh trí IPTG a chur leis.I gcodarsnacht leis sin, ní raibh aon éifeacht ar fhoirmiú ná ar scaipeadh bithscannáin ag p-nitrophenyl-alfa-L-fiúcós (NPF) a bhfuil ard-chleamhnas aige do na leachtanna P. aeruginosa LecB (PA-IIL).Ní raibh aon tionchar ag láithreacht IPTG, NPG nó NPF ar fhás planctónach P. aeruginosa PAO1, agus ní raibh an brú in ann na siúcraí seo a úsáid mar fhoinsí carbóin, rud a thugann le tuiscint go raibh na héifeachtaí breathnaithe ar fhoirmiú bithscannáin mar gheall ar chosc iomaíoch ar LecA-ligand. ceangailteach.Fuarthas torthaí comhchosúla freisin do bhithscannáin a fhástar faoi choinníollacha sreafa dinimiciúil ar chúpóin chruach, rud a thugann le tuiscint go gcuireann LecA le hailtireacht bithscannáin P. aeruginosa faoi choinníollacha comhshaoil ​​éagsúla.

Tá alfa-L-fucosidase (EC 3.2.1.51) atá in ann an t-iarmhar t-fucosil a scaoileadh ó thaobhshlabhra na n-oligosaccharides xileoglúcacha braite i nduilleoga plandaí Arabidopsis.Ina theannta sin, íonaíodh alfa-L-fucosidase le sainiúlacht an tsubstráit chomhchosúil ó dhuilleoga cabáiste (Brassica oleracea) chun banna amháin a sholáthar ar SDS-PAGE.Fuarthas dhá sheicheamh peptíde ón mbanda próitéine seo, agus úsáideadh iad chun códú géine Arabidopsis a aithint le haghaidh alfa-fucosidase a mholaimid AtFXG1 a ghlaoch.Ina theannta sin, fuarthas géine Arabidopsis le homaleolaíocht a bhfuil alfa-L-fucosidases ar eolas uirthi, agus mholamar é a ainmniú mar AtFUC1.Cuireadh AtFXG1 agus ATFUC1 araon in iúl go heitreolaíoch i gcealla pastoris Pichia agus na gníomhaíochtaí alfa-L-fucosidase a cuireadh ar fáil don mheán cultúir.Bhí an alfa-L-fucosidase ionchódaithe ag AtFXG1 gníomhach i gcoinne na n-oligosaccharides ó xyloglucan XXFG chomh maith i gcoinne 2'-fucosyl-lactitol ach ní i gcoinne p-nitrophenyl-alpha-L-fucopyranoside.Mar sin féin, ní raibh an AtFUC1 a cuireadh in iúl go heitreolaíoch gníomhach ach amháin i gcoinne 2'-fucosyl-lachtitol.Dá bhrí sin, ní mór an chéad cheann a bheith bainteach le meitibileacht xileoglúcan.